یک فرآیند کارآمد و کم هزینه برای شفاف سازی و اولترافیلتراسیون پروتئین های نوترکیب بیان کننده مخمر
بیان مخمر ژنهای اگزوژن نه تنها میتواند پروتئینها و پپتیدهای نوترکیب، آنتیبادیها و واکسنها، سیتوکینها، فاکتورهای رشد، هورمونها و سایر مواد فعال زیستی تولید کند، بلکه میتواند برای تولید آنزیمهای صنعتی، مواد غذایی کاربردی و مواد بیولوژیکی نیز استفاده شود که چشمانداز کاربرد گستردهای دارد. .
سیستم بیان مخمر شامل دو سیستم بیانی رایج است، یعنی سیستم بیانی ساکارومایسس سرویزیه و سیستم بیان مخمر متانوتروفیک. سیستم بیان مخمر متانول در حال حاضر پرمصرف ترین سیستم بیان مخمر است و Pichia رایج ترین مورد استفاده است که می تواند از متانول به عنوان کربن و انرژی استفاده کند. علاوه بر این، مخمر Hansen، Sphaeroides و غیره وجود دارد.
مهم نیست که چه نوع سیستم بیان مخمری، فرآیندهای جداسازی و خالص سازی پایین دست آن مشابه است، و جریان فرآیند خاص بیان مخمر پروتئین های نوترکیب و داروهای پلی پپتیدی را به عنوان مثال در نظر می گیرد.
کاست های غشایی میکروفیلتراسیون هدایت شونده از کانال جریان باز و حالت فیلتراسیون جریان مماسی استفاده می کنند، که می تواند به طور موثر مایع خوراک پیچیده مانند مایع تخمیر مخمر و مایع ترک خوردگی E. coli را با سرعت بالا پردازش کند و می تواند تقویت خطی را از مقیاس آزمایش کوچک تا مقیاس تولید تضمین کند. طراحی ماژولار فشرده، اتصال ساده خط لوله، استقلال و خوانایی سیستم می تواند از اپراتورها محافظت کند و از آلودگی بیولوژیکی جلوگیری کند. و بدون تایید تعمیر و نگهداری و تمیز کردن. بنابراین، برای مرحله شفاف سازی پردازش اولیه پایین دستی بسیار مناسب است.
هدف اصلی فرآیند UF/DF حذف ناخالصی ها و جابجایی بافرها است. کاست غشایی اولترافیلتراسیون هدایت کننده دارای همگنی خوب در اندازه منافذ غشا و آب دوستی قوی است که می تواند به غشاء شار بالاتر و جذب پروتئین کمتر و طراحی کانال جریان بهینه با افت فشار کمتر، انتقال آسان مواد و زمان فیلتراسیون را به میزان قابل توجهی کوتاه کند. علاوه بر این، سری محصول کامل و انعطاف پذیر است تا نیازهای کاربردهای مختلف در مقیاس های مختلف را برآورده کند. بنابراین، برای مرحله UF/DF پردازش پایین دستی بسیار مناسب است.
مورد زیر کاربرد غشاء Guidling استنوار کاستدر بیان مخمر پروتئین های نوترکیب
شفاف سازی میکروفیلتراسیون
ما از {{0}}.11 متر مربع از کاست غشایی منافذ 0.22μm برای شفاف کردن 1.5 لیتر مایع تخمیر مخمر (وزن مولکولی پروتئین هدف 42-55 KD) با میکروفیلتراسیون استفاده کردیم. در کل فرآیند میکروفیلتراسیون، میزان بازیابی پروتئین هدف، تغییر کدورت و کاهش شار غشا مورد بررسی قرار گرفت.
0-17دقیقه فرآیند غلظت است، 17-32دقیقه فرآیند شستشو و فیلتراسیون است. در طول کل فرآیند میکروفیلتراسیون، TMP به تدریج افزایش یافت، سرعت ورودی مایع بدون تغییر باقی ماند و میانگین شار مواد 45LMH بود.
کدورت مایع قبل از میکروفیلتراسیون 600NTU و بعد از میکروفیلتراسیون 8NTU بود و کدورت به وضوح تغییر کرد.
نتایج نشان داد که بازده پروتئین هدف > 90 درصد بود. کاست غشایی 0.22μm فناوری Guidling پایدار و مناسب برای این سناریوی کاربردی است.
غلظت اولترافیلتراسیون
غلظت اولترافیلتراسیون 1.5 لیتر مایع شفاف (وزن مولکولی پروتئین هدف 42-55kd) با استفاده از کاست غشایی 10 کیلو داتونی 0}.11 متر مربع انجام شد. در کل فرآیند اولترافیلتراسیون، میزان بازیابی پروتئین هدف، کاهش شار غشایی و نرخ بازیابی شار آب مورد بررسی قرار گرفت.
قبل و بعد از استفاده، میزان بازیابی غشا می تواند به 90٪ برسد.
0-15دقیقه فرآیند غلظت است، 15-18دقیقه فرآیند تبادل مایع است. در طول کل فرآیند اولترافیلتراسیون، TMP به تدریج افزایش یافت، سرعت ورودی مایع بدون تغییر باقی ماند و میانگین شار مواد 50LMH بود.
نتایج نشان داد که پروتئین مورد نظر کاملاً به دام افتاده است. کاست های غشایی 10 کیلو دات ولت Guidling می توانند به طور پایدار اجرا شوند و برای این سناریو کاربردی مناسب هستند.
بسیاری از پروتئین های نوترکیب بیان شده توسط مخمر به شدت بیان نشدند. کدورت مایع فیلتر شده به وضوح کاهش یافت و نرخ بازیابی پروتئین بالاتر بود. از آنجایی که زمان کروماتوگرافی بعدی بسیار طولانی است، باعث ایجاد اثرات نامطلوب بر روی پروتئین می شود، به منظور کوتاه شدن زمان نمونه برداری کروماتوگرافی، می توان یک مرحله غلظت اولترافیلتراسیون را اضافه کرد و پروتئین مورد نظر را می توان به سرعت بعد از نمونه تغلیظ کرد، که می تواند دستیابی به هدف صرفه جویی در زمان، کاهش حجم پرکننده و در نتیجه کاهش هزینه تولید.
کاست های غشایی میکروفیلتراسیون فناوری Guidling می توانند به طور کلی کدورت مایع خوراک را به کمتر از 20NTU کاهش دهند و نیازهای اولترافیلتراسیون و کروماتوگرافی بعدی را به طور کامل برآورده کنند. نرخ بازیابی اولترافیلتراسیون کاست های غشایی اولترافیلتراسیون به دلیل مواد مختلف متفاوت است، نرخ بازیابی کلی می تواند به 90-95٪ برسد.
Guidling Technology از شما برای درخواست کیت های تست برای ارزیابی مرتبط استقبال می کند.
درباره هدایت
Guidling Technology یک شرکت ملی با فناوری پیشرفته است که بر روی بیوداروها، کشت سلولی، تصفیه و غلظت زیست پزشکی، تشخیص و مایعات صنعتی تمرکز دارد. ما دستگاههای فیلتر گریز از مرکز، کاستهای اولترافیلتراسیون و میکروفیلتراسیون، فیلتر ویروس، سیستم TFF، فیلتر عمق، فیبر توخالی و غیره را با موفقیت توسعه دادهایم. غشاها و فیلترهای غشایی ما به طور گسترده در غلظت، استخراج و جداسازی پیش فیلتراسیون، میکروفیلتراسیون، اولترافیلتراسیون و نانوفیلتراسیون استفاده می شوند. خطوط تولید متعدد ما، از فیلتراسیون آزمایشگاهی کوچک و یکبار مصرف گرفته تا سیستم های فیلتراسیون تولید، آزمایش عقیم سازی، تخمیر، کشت سلولی و موارد دیگر، نیازهای آزمایش و تولید را برآورده می کند. Guidling Technology مشتاقانه منتظر همکاری با شما است!
