سوالات متداول در مورد دستگاه های فیلتر گریز از مرکز

Q1. جدا کردن پروتئین ها با وزن های مولکولی مختلف ضروری است، بنابراین وزن مولکولی پروتئین ها چقدر باید تفاوت داشته باشد؟

پاسخ: اندازه دو پروتئین باید 10 برابر یا بیشتر متفاوت باشد.

 

Q2. می تواند سانتریفیوژ کندalدستگاه های فیلتر استریل و مقاوم در برابر شستشوی قلیایی هستند؟

پاسخ: می توان آن را با محلول آبی اتانول 75 درصد استریل کرد و غشاء می تواند 0 را تحمل کند.1-0.5N شستشوی قلیایی هیدروکسید سدیم.

 

Q3. اگر پروتئین در حین تغلیظ رسوب کرد، چگونه با آن برخورد کنیم؟

پاسخ: اگر پروتئین خیلی سریع یا خیلی غلیظ شود، ممکن است باعث رسوب پروتئین شود و غلظت نهایی پروتئین پس از غلظت نباید خیلی زیاد باشد. پروتئین هایی که به سرعت غلظت حساس هستند و تمایل به رسوب دارند، روش بهبود پیشنهاد شده است:

سرعت گریز از مرکز را کاهش دهید

از غشای اولترافیلتراسیون با وزن مولکولی بالاتر استفاده کنید

لوله غلیظ را باد کرده و بمکید و سپس سانتریفیوژ کنید

 

Q4. دلیل احتمالی چیست؟دستگاه های فیلتر گریز از مرکزنمی توان سانتریفیوژ کرد؟

پاسخ: اگر لوله اولترافیلتراسیون را نمی توان سانتریفیوژ کرد، می توانید از محلول آبی اتانول 20 درصد برای سانتریفیوژ اولیه استفاده کنید، زیرا غشای اولترافیلتراسیون کاملاً خشک است، سطح غشاء آبگریز ضعیف است، و شار را می توان پس از نفوذ با یک سانتریفیوژ پایین بازگرداند. حلال کشش سطحی

 

Q5. روش های استفاده صحیح و ذخیره سازی دستگاه های فیلتر گریز از مرکز

پاسخ: دستگاه های فیلتر گریز از مرکز باید قبل از استفاده با آب تصفیه شده سانتریفیوژ شوند تا یکپارچگی آن بررسی شود. پس از هر بار استفاده باید در حالت مرطوب نگهداری شود تا از خشک شدن غشا جلوگیری شود.

 

Q6. دستگاه های فیلتر گریز از مرکز چگونه اندوتوکسین را حذف می کنند؟

پاسخ: دستگاه های فیلتر گریز از مرکز ارائه شده با اندوتوکسین ها درمان نشده اند، و از آنجایی که اندوتوکسین ها به طور گسترده در طبیعت وجود دارند، نمونه هایی که به اندوتوکسین نیاز دارند را می توان قبل از آزمایش با هیدروکسید سدیم {{1}.5N از قبل تمیز کرد و سپس با آن شست و شو داد. آب RO برای حذف بیشتر اندوتوکسین.

 

Q7. وقتی از پروتئین غلیظ برای تجزیه و تحلیل پایین دست استفاده می شود، مشخص می شود که تداخلی وجود دارد، دلیل آن چیست؟

پاسخ: دستگاه های فیلتر گریز از مرکز را می توان با محلول بافر یا آب تصفیه شده از قبل شستشو داد. اگر تداخل همچنان وجود دارد، با هیدروکسید سدیم 0.1N بشویید و سپس با آب تصفیه شده بشویید.

 

Q8. It مشخص شد که پروتئین هدفی در کنسانتره پس از تغلیظ وجود ندارد. دلایل احتمالی چیست؟

پاسخ: 1) غلظت اولیه پروتئین نباید خیلی کم باشد، اگر غلظت خیلی کم باشد، ممکن است غشاء نتواند حفظ شود.

2) اندازه منافذ غشا مناسب را انتخاب کنید. غلظت گریز از مرکز لوله فیلتر متعلق به فیلتراسیون بن بست است و اندازه منافذ غشاء به طور کلی کمتر از 2 برابر یا بیشتر از پروتئین هدف است.

3) سرعت گریز از مرکز مناسب را انتخاب کنید

4) آیا پروتئین هدف رسوب می کند یا خیر

 

Q9. عملیات غیرفعال سازی دستگاه های فیلتر گریز از مرکز

پاسخ: پیش تیمار غیرفعال سازی سطح دستگاه های فیلتر گریز از مرکز می تواند از دست دادن جذب پروتئین روی سطح غشاء را کاهش دهد، در اکثر موارد، پیش تصفیه ستون قبل از تغلیظ محلول پروتئین رقیق شده می تواند بازیابی را بهبود بخشد، زیرا محلول می تواند سطح در معرض را پر کند. محل های جذب پروتئین خالی روی غشاء و سطح، روش غیرفعال سازی به این صورت است که ستون را با حجم بالایی از محلول غیرفعال سازی به مدت بیش از 1 ساعت از قبل خیس کنید، ستون را کاملاً با آب مقطر شستشو دهید و سپس ستون را یک بار با آب مقطر سانتریفیوژ کنید. برای از بین بردن کامل محلول غیرفعال سازی که ممکن است روی غشا باقی بماند، مراقب باشید که غشا بعد از غیرفعال کردن خشک نشود، اگر می خواهید آن را برای استفاده بعدی نگه دارید، باید آب مقطر استریل اضافه کنید تا غشا مرطوب بماند. لطفا تماس بگیرید. مهندسان ما برای راه حل های متداول غیرفعال سازی.

 

Q10. آیا غشای اولترافیلتراسیون مولکول ها را به صورت سلسله مراتبی فیلتر می کند؟

A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 درصد در صورت استفاده از غشای اولترافیلتراسیون 100 کیلویی، مولکول های کوچکتر از اندازه منافذ غشا به طور کامل آزادانه از غشا عبور نمی کنند. میزان ماندگاری مولکولی 67 کیلو دالتون بیش از 70 درصد است و پروتئین 43 کیلو دالتون نیز بیش از 40 درصد قطع می شود، اجزای مختلف در یک محلول مخلوط از غشاء عبور می کنند نه به سادگی و آسانی یک محلول تک جزئی، در عمل. ، اگر می خواهید دو ماکرومولکول را جدا کنید، اختلاف وزن مولکولی بین آنها باید هشت برابر یا بیشتر باشد.

 

Q11. چگونه به طور موثر مولکول های بزرگ و کوچک را از طریق اولترافیلتراسیون جدا کنیم؟

پاسخ: به دلیل نیاز فرآیند، ناخالصی های موجود در ماکرومولکول ها حذف می شود یا مولکول های کوچک از ماکرومولکول ها خارج می شوند، در تولید طبیعی است. انتخاب اندازه منافذ غشا، روش فیلتراسیون و شرایط عملیاتی مناسب بسیار ضروری است. به طور کلی، اگر مشخصات MWCO غشاء بین دو پروتئین انتخاب شود، می توان به یک جداسازی نسبتا ایده آل دست یافت. اگر محلول پروتئین نسبتاً رقیق باشد، کار در فشار کم نیز به دستیابی به نتایج بهتر کمک می کند. فیلتراسیون جریان مماسی را انتخاب کنید و دیافیلتراسیون چندگانه را انجام دهید تا اثر جداسازی بهتری داشته باشید.