فرآیند تصفیه پایین دست واکسن اسهال خوک

اسهال یکی از سه بیماری عمده ای است که زیان اقتصادی زیادی به صنعت خوک در چین وارد کرده است. عوامل زیادی باعث اسهال در خوک ها می شود و عوامل ویروسی جدی ترین آنها هستند. خوک ها در هر سنی می توانند آلوده شوند، به خصوص خوکچه های شیرده، و میزان مرگ و میر پس از آلودگی می تواند به بیش از 50٪ برسد. ویروس اسهال اپیدمی خوک (PEDV) و ویروس گاستروانتریت قابل انتقال خوک (TGEV) در جهان گسترده هستند و این دو ویروس می توانند به تنهایی یا در ترکیب با هم آلوده شوند. در حال حاضر هیچ داروی خاصی برای درمان PEDV و TGEV وجود ندارد و پیشگیری و کنترل اسهال خوک عمدتاً واکسن های تجاری هستند.

واکسن های سنتی اسهال اپیدمی خوک عمدتاً شامل واکسن غیرفعال شده با ویروس کامل و واکسن ضعیف شده زنده است. از نظر بالینی، واکسن غیرفعال شده پشت سر هم PEDV و TGEV یا واکسن ضعیف شده، و PEDV، TGEV و واکسن غیرفعال سه گانه روتاویروس خوک (RV) یا واکسن ضعیف شده معمولاً استفاده می شود، عمدتاً واکسن پشت سر هم PEDV و TGEV.

در حال حاضر، واکسن های زیادی علیه اسهال اپیدمی خوک در چین وجود دارد.

فرآیند تولید واکسن های غیرفعال و ضعیف شده مشابه است، عمدتا شامل پنج مرحله کشت پاتوژن، غیرفعال سازی یا ضعیف شدن پاتوژن، استخراج و خالص سازی پاتوژن، آماده سازی و بسته بندی واکسن، و کنترل کیفیت واکسن. این مقاله عمدتاً به معرفی روش خالص سازی پاتوژن می پردازد.

شفاف سازی

هدف از شفاف سازی اطمینان از حذف بقایای سلولی و سایر ذرات بزرگ است. در تولید انواع زهر در کشت سلولی، علاوه بر اینکه حاوی تعداد زیادی ذرات ویروسی است، بقایای بافت سلولی و محصولات متابولیکی و سایر ناخالصی‌ها وجود دارد که باعث می‌شود زهر در حالت کدر یا نیمه ابری، مستقیم باشد. استفاده از این عملیات غلظت زهر به زودی باعث مسدود شدن غشای اولترافیلتراسیون می شود و نمی تواند غلظت سم را کامل کند و در نتیجه ضایعات غشای اولترافیلتراسیون ایجاد می شود. بنابراین قبل از اینکه سم غلیظ شود ابتدا باید شفاف شود که معمولاً با سانتریفیوژ با سرعت پایین و فیلتراسیون غشایی انجام می شود. لازم به ذکر است که هنگام استفاده از فناوری جداسازی غشایی، به دلیل اینکه مواد غشایی اغلب دارای گروه های الکترونگاتیوی یا آبگریز هستند، باید بررسی شود که آیا ماده غشاء جذب ذرات ویروسی است یا خیر.

یک مرحله شفاف سازی کارآمد به ترکیبی از ظرفیت حذف ذرات جامد بالا و بازده محصول بالا، تقویت آسان و حفاظت از واحدهای عملیاتی بعدی نیاز دارد. در حال حاضر از فیلتر عمیق برای عملیات شفاف سازی استفاده می شود.

با این حال، زمانی که مقیاس کشت بیش از حد بزرگ باشد، به تعداد زیادی غشاء فیلتر عمیق نیاز خواهد بود که منجر به افزایش قابل توجهی در هزینه مواد مصرفی می شود. در عین حال، تراکم بالای کشت سلولی، بار غشای فیلتر عمیق را کاهش می دهد و در نتیجه باعث افزایش هزینه ها و رقیق شدن بیش از حد محصول می شود.

روش میکروفیلتراسیون عمدتاً از دستگاه فیلتراسیون جریان مماسی استفاده می کند و اجزای غشاء کاست غشای تخت و فیبر توخالی هستند. فیلتراسیون جریان مماسی (TFF) توسط اختلاف فشار غشایی هدایت می شود. مواد و ناخالصی های کوچکتر از اندازه منافذ غشا از غشا عبور می کنند، در حالی که ناخالصی هایی مانند سلول هایی با ذرات بزرگتر به دام می افتند. اندازه منافذ غشاء مورد استفاده برای میکروفیلتراسیون {{0}}.45/0.22μm است. میکروفیلتراسیون جریان مماسی فیبر توخالی می تواند به طور مستقیم مایع با محتوای جامد بالا، مانند محیط کشت سلولی با چگالی بالا را پردازش کند، می تواند مراحل سانتریفیوژ و پیش فیلتراسیون را با مراحل کمتر و عملیات ساده حذف کند، غشاء را می توان به طور مکرر از طریق تمیز کردن، کاهش سرمایه گذاری تجهیزات و عملیات استفاده کرد. هزینه ها، مطابق با الزامات تولید خودکار مدولار.

تغلیظ و تصفیه

پس از شفاف سازی اولیه، محیط کشت ویروس همچنان حاوی تعداد زیادی ناخالصی از جمله ذرات معیوب، پوسته ویروسی، سیتوتوکسین، محیط، قطعات سرم و سلولی و غیره است. اگر این ناخالصی ها به حیوانات تزریق شود، نه تنها بر کارایی آن تأثیر می گذارد. واکسن، بلکه باعث پاسخ ایمنی قوی میزبان می شود و حتی منجر به مرگ حیوانات واکسینه شده می شود. بنابراین، غلظت و خالص سازی برای حذف ناخالصی ها مانند هتروپروتئین ها و قطعات سلولی، تقویت و القای پاسخ های ایمنی موثر، کاهش مقدار واکسن مصرفی و کاهش واکنش های نامطلوب مورد نیاز است.

اصل خالص سازی ویروس: برای حفظ فعالیت بیولوژیکی و عفونی بودن ویروس به عنوان مقدمه، حذف ناخالصی های ویروس و استخراج خلوص بالای ویروس.

در حال حاضر، روش های اصلی غلظت و تصفیه مورد استفاده در تولید در مقیاس بزرگ، اولترافیلتراسیون است.

روش اولترافیلتراسیون، عمدتاً از دستگاه اولترافیلتراسیون جریان مماسی، سیستم فیلتراسیون فیبر توخالی و سایر تجهیزات فیلتراسیون استفاده می کند، در شرایط عادی، استفاده از روش اولترافیلتراسیون می تواند باعث شود که ویروس بیش از 100 بار متمرکز شود، میزان حذف هتروپروتئین تا 99٪. در این میان، فناوری فیلتراسیون غشایی فیبر توخالی دارای مزایای نیروی برشی ملایم و کم، اتصال آسان، عملکرد انعطاف پذیر، عمر طولانی و هزینه کم و تقویت آسان است، بنابراین توصیه می شود فیبر توخالی را برای غلظت و تصفیه ویروس انتخاب کنید.

هنگامی که از روش اولترافیلتراسیون برای تغلیظ و خالص سازی استفاده می شود، انتخاب اندازه منافذ غشا مناسب بسیار مهم است که مستقیماً کارایی و کیفیت غلظت را تعیین می کند. از یک سو، انتخاب دیافراگم غشایی برای به دام انداختن موثر مولکول های هدف برای اطمینان از بازده، ضروری است و از سوی دیگر، اثر حذف و سرعت پردازش هتروپروتئین ها باید به طور کامل در نظر گرفته شود. بنابراین بهترین اصل انتخاب غشایی با بزرگترین اندازه منافذی است که بتواند مولکول هدف را به دام بیندازد و سعی کنید غشای فیلتر را با توزیع اندازه منافذ یکنواخت انتخاب کنید.

ویروس اسهال اپیدمی خوک (PEDV) و ویروس گاستروآنتریت قابل انتقال (TGEV) هر دو کروناویروس‌ها هستند که کره‌های چندشکل هستند، با سنبله‌های سر به‌اندازه مانند سنبله، با قطر 60 تا 190 نانومتر. بیماری روتاویروس یک بیماری مشترک بین انسان و دام است که در آن روتاویروس (RV) ظاهری چرخ مانند دارد و قطر آن حدود 70 نانومتر است. این سه ویروس را می توان با استفاده از غشاهای اولترافیلتراسیون دیافراگم 100-750kd رهگیری کرد.

Guidling Technology یک شرکت ملی با فناوری پیشرفته است که بر روی بیوداروها، کشت سلولی، تصفیه و غلظت زیست پزشکی، تشخیص و مایعات صنعتی تمرکز دارد. ما دستگاه‌های فیلتر گریز از مرکز، کاست‌های اولترافیلتراسیون و میکروفیلتراسیون، فیلتر ویروس، سیستم TFF، فیلتر عمق، فیبر توخالی و غیره را با موفقیت توسعه داده‌ایم. غشاها و فیلترهای غشایی ما به طور گسترده در غلظت، استخراج و جداسازی پیش فیلتراسیون، میکروفیلتراسیون، اولترافیلتراسیون و نانوفیلتراسیون استفاده می شوند. خطوط تولید متعدد ما، از فیلتراسیون آزمایشگاهی کوچک و یکبار مصرف گرفته تا سیستم های فیلتراسیون تولید، آزمایش عقیم سازی، تخمیر، کشت سلولی و موارد دیگر، نیازهای آزمایش و تولید را برآورده می کند. Guidling Technology مشتاقانه منتظر همکاری با شماست!