مطالعه توانایی مهار ویروس در فرآیند پایین دستی آنتی بادی مونوکلونال

Nov 18, 2024

محصولات بیوتکنولوژی مشتق شده از رده های سلولی ممکن است در معرض خطر آلودگی ویروسی باشند - میزان آن به عوامل متعددی از جمله منبع تهیه، مواد خام مورد استفاده، سیستم تولید، معرف های تصفیه و مواد کمکی بستگی دارد. مطالعه حذف یا غیرفعال کردن ویروس‌ها در فرآیند تولید، گامی کلیدی در کاهش پتانسیل انتقال ناتروژنیک ویروس‌های بیماری‌زا و در نتیجه کاهش خطر است که برای ایمنی محصولات ضروری است. قبل از اینکه محصولات بیولوژیکی وارد آزمایشات بالینی شوند و به بازار عرضه شوند، فرآیند تولید آنها باید نشان داده شود که توانایی حذف ویروس های شناخته شده و فرضی را دارند.

تحقیق در مورد توانایی حذف ویروس معمولاً با افزودن ویروس نشانگر تیتر شناخته شده به محصول میانی در مراحل مختلف تولید، سپس تعیین تیتر باقیمانده ویروس در نمونه تحت درمان با یک فرآیند خاص، و در نهایت ارزیابی مقدار کاهش log (LRV) است. از تیتر ویروس مراحل فرآیند برای LRV بزرگتر یا مساوی 4log10 معمولاً به عنوان مراحل موثر حذف ویروس در نظر گرفته می شوند. فرآیند با LRV<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.

هنگام استفاده از روش فرآیند تولید شبیه سازی شده (فرایند کاهش یافته)، لازم است یک طرح تحقیق و آزمایش حذف/غیرفعال سازی معقول ویروس مرتبط با فرآیند تولید واقعی تا آنجا که ممکن است، به ویژه مراحل موثر فرآیند تولید طراحی شود. فرآیند شبیه سازی شده باید از نظر پارامترهای تست و شرایط کنترل کاملاً با فرآیند واقعی سازگار باشد.

ویروس های شاخص رایج در جدول 1 نشان داده شده است.

در مرحله آزمایشی کاربرد داروی جدید (IND)، یک محصول بیوتکنولوژی نیازمند مطالعات پاکسازی ویروسی برای حداقل 2 ویروس مدل است که معمولاً یک رتروویروس (X-MuLV) و یک پاروویروس (MMV) را انتخاب می‌کنند. در طول مرحله درخواست مجوز بیولوژیک (BLA)، مطالعات حذف ویروس معمولاً با استفاده از 3-5 ویروس خاص/غیر اختصاصی انجام می‌شود و مراحل فرآیند 3-5 ارزیابی می‌شوند تا نشان دهند که محصول دارای ضریب ایمنی کافی است. دیدگاه ایمنی ویروس به دلیل دستورالعمل های مختلف در داخل و خارج از کشور، در مراحل تأیید پاکسازی ویروس که برای اعلامیه ها استفاده می شود، تفاوت هایی وجود دارد. طرح‌های تأیید پاکسازی ویروس معمولاً در فرآیند تولید mAb در جدول 2 نشان داده شده است.

از سال 2009، محصولات آنتی بادی مونوکلونال برای IND و BLA، کروماتوگرافی میل ترکیبی پروتئین A، PH پایین، کروماتوگرافی تبادل آنیونی AEX (حالت نفوذ جریان)، کروماتوگرافی تبادل کاتیونی CEX (بایدینگ - حالت شستشو)، و اعتبار سنجی پاکسازی ویروس بدون احتساب به FDA ارسال شدند. فیلتراسیون ویروس رایج ترین خانواده ویروس های شاخص مورد استفاده هستند و میانگین و دامنه اثرات پاکسازی آنها در نشان داده شده است شکل 1.

برای رتروویروس ها، به استثنای CEX که دارای LRV حدود 3log10 است (همانطور که در نمودار A-bar در شکل 1 نشان داده شده است)، سایر فرآیندها قوی بودند (LRV بزرگتر یا مساوی 4log10). هرپس ویروس ها و رتروویروس ها اثرات پاکسازی مشابهی دارند و LRV > 4log10 (همانطور که در نمودار B-bar در شکل 1 نشان داده شده است). ویروس های کوچک بدون پوشش، مانند پاروویروس، به طور موثر حذف می شوند، در برابر عملیات شیمیایی مقاوم هستند و به راحتی توسط فیلترها به دام نمی افتند (در نمودار C-bar در شکل 1 نشان داده شده است). فقط فیلترهای ویروسی AEX و کوچک در حذف پاروویریدها موثر بودند (متوسط LRV > 4log10).

فرآیندهایی که در شکل 1 نشان داده شده اند عبارتند از ProteinA، AEX (حالت نفوذ جریان)، CEX (حالت همزمان شستشو)، غیرفعال کردن pH پایین (" ناقص "در مقابل" کامل "حذف") و فیلتراسیون دی ویروس با دیافراگم بزرگ و کوچک.

توزیع مقادیر LRV برای هر فرآیند در شکل 2 نشان داده شده است. مطالعات با 0 ~ 21og10 به عنوان گروه LRV پایین و آنهایی که بیش از 6log10 داشتند به عنوان گروه LRV بالا برای تجزیه و تحلیل مقایسه طبقه بندی شدند.

بین مقدار LRV فرآیند پروتئین A و بافر تعادل/شستشو، پرکننده، ترکیب شوینده و مقدار pH شستشو، ارتباط معنی‌داری وجود نداشت. مخرج مشترک گروه کم LRV این است که ماده اولیه کاملاً پیچیده است و ممکن است تعامل پیچیده مواد اولیه و پرکننده بر توانایی ستون کروماتوگرافی برای حذف ویروس ها تأثیر منفی بگذارد.

اشتراوس و همکاران نشان داد که pH و هدایت نمونه های AEX می تواند بر LRV تاثیر بگذارد. با این حال، نتایج آماری Miesegaes و همکاران نشان داد که مشابه ProteinA، LRV AEX (حالت نفوذ جریان) با بافرها، پرکننده‌ها، pH و رسانایی مختلف همبستگی معنی‌داری ندارد که ممکن است به دلیل بهینه‌سازی pH و هدایت باشد. در شرایط فرآیند پرونده گزارش شده

حذف ویروس توسط فرآیند CEX به اندازه کافی قوی نیست. هیچ ارتباط معنی داری بین LRV در گروه LRV بالا و بافر، سطح تجربه، یا هر ویژگی ستون کروماتوگرافی، مانند ارتفاع ستون و نوع رزین وجود نداشت. با این حال، مقادیر pH تعادل/بارگیری و شستشو مورد استفاده در مطالعه LRV بالا هر دو پایین‌تر بودند، در 2.2 ± 5.30. در گروه LRV پایین، pH 6 بود.0±0.2. عامل دیگر این است که غلظت نمک در بافر نیز می تواند باعث اختلاف مقدار LRV شود. بافر مورد استفاده در مطالعه LRV کم، غلظت نمک بالاتری داشت، با غلظت متوسط 290±120 میلی مولار در محلول بارگذاری/تعادل و 70±340 میلی مولار در شوینده، در حالی که غلظت NaCl در مطالعه LRV بالا 58 بود. به ترتیب 27± و 31±183 میلی‌مولار.

در فرآیند pH پایین، pH یک پارامتر کلیدی فرآیند است و pH 3.8 برای غیرفعال کردن رتروویروس بر اساس درجه کافی است. گروه LRV پایین دارای pH 3.9 بود، در حالی که مطالعه LRV بالا دارای pH 3.4 بود.

برای فیلترهای دیافراگم کوچک و بزرگ، مقدار LRV حذف MuLV کمتر از 2log10 نبود و تنها 1% از مطالعات زیر 3log10 بود (در ستون های h و i در شکل 2 نشان داده شده است). پاکسازی کلی رتروویروس ها توسط فیلترهای ویروسی با دیافراگم بزرگ کمتر از فیلترهای ویروسی با دیافراگم کوچک بود (همانطور که در نمودار C-bar در شکل 1 نشان داده شده است). دلیل اصلی موثر بر نتیجه حذف پاروویروس، انواع فیلترهای مختلف است. به طور کلی، فیلتر کردن آنتی ویروس می تواند به طور قابل اعتماد ویروس ها را حذف کند.

فرآیندها عبارتند از: پروتئین A(a)، حالت نفوذ AEX (b)، اتصال CEX - حالت شستشو (c)، اتصال AEX Ⅰ حالت شستشو (d)، غیرفعال کردن pH پایین (" ناقص "و" "ترخیص کامل") (e ~ g)، و اندازه منافذ بزرگ (h) و اندازه منافذ کوچک (i ~ j) فیلتراسیون ضد ویروس (که در آن، a ~ i: رتروویروس؛ j: پاروویروس).

توسعه و نوآوری مستمر در زمینه فرآیندهای بیودارویی پایین دست، ناگزیر نوآوری هایی را در ارزیابی پاکسازی ویروس به همراه خواهد داشت. پیشرفت در فرآیندهای بالادستی و پایین دستی - مانند فرآیندهای زیستی جریان مداوم - ارزیابی و ایجاد فرآیندهای موثر و قوی حذف ویروس را ضروری کرده است. در طول جریان مداوم، انتظار می رود مراحلی مانند غیرفعال کردن ویروس و فیلتر کردن ویروس همچنان در حالت دسته ای انجام شود. اگرچه قابلیت حذف ویروس در فرآیندهای کروماتوگرافی در حالت جریان پیوسته نباید تفاوت اساسی با پردازش دسته ای داشته باشد، اما باید توسط داده ها پشتیبانی شود.

از منظر ایمنی ویروس شناسی، ایمنی عالی صنعت بیودارویی را می توان تا حد زیادی به پایبندی دقیق این صنعت به سه استراتژی کلیدی برای ایمنی ویروسی نسبت داد: منبع یابی و آزمایش کافی منابع مواد و بانک سلولی، مستندسازی ارزیابی های پاکسازی ویروسی (مطالعات تایید ویروس)، و آزمایش ویروسی در فرآیند ویژگی‌های داروهای بیولوژیک تولید شده توسط بسترهای سلولی جدید ممکن است با خطرات مختلف تغییر کند، و برای اطمینان از ایمنی داروهای بیولوژیک به استراتژی‌های مدیریت ریسک خوبی نیاز است. Guidling Technology دارای تیم فنی حرفه ای با تجربه است که فرآیند فیلتراسیون را از آزمایش کوچک، آزمایشی آزمایشی تا تولید در مقیاس بزرگ پوشش می دهد، فیلترهای غشایی و غشایی ما به طور گسترده در پیش فیلتراسیون، میکروفیلتراسیون، اولترافیلتراسیون، غلظت نانوفیلتراسیون، استخراج و جداسازی استفاده می شود. خطوط تولید متعدد ما، از فیلتراسیون آزمایشگاهی یکبار مصرف کوچک گرفته تا سیستم های فیلتراسیون مبتنی بر تولید، آزمایش عقیم سازی، تخمیر، کشت سلولی و غیره، افزایش بهره وری را تضمین می کند.

Jiuling برای اطمینان از کیفیت محصول به عنوان اولین شاخص، در تعقیب "کاهش هزینه ها، افزایش بهره وری" در جاده برای اکتشاف، مشتاقانه منتظر همکاری با شما در آینده برای رویارویی با چالش های صنعت و جستجوی توسعه بهتر هستیم.

یک جفت: مطالعه کاربرد فیلتراسیون عمیق در فرآیند تولید واکسن بیماری تب برفکی

بعدی: فرآیند تصفیه پایین دست واکسن اسهال خوک