کروماتوگرافی غشایی تبادل آنیون ضعیف DEAE

کروماتوگرافی غشایی تبادل آنیون ضعیف DEAE - معرفی محصول

 

1. بررسی اجمالی

کروماتوگرافی تبادل آنیون ضعیف DEAE یک تکنیک خالص سازی است که بر اساس تفاوت در خواص بار و چگالی بار بیومولکول های مختلف است. از آنجایی که بیشتر بیوماکرومولکول‌ها دارای گروه‌های عاملی مانند گروه‌های کربوکسیل یا هیدروکسیل هستند، ویژگی‌های بار و مقدار آن‌ها را می‌توان با اصلاح pH محلول بافر تنظیم کرد. پس از اتصال مولکول های زیستی به یک آنیون یا محیط تبادل کاتیونی با بار مخالف، جداسازی با تغییر قدرت یونی یا pH فاز متحرک حاصل می شود. ابتدا مولکول‌هایی با میل پیوند ضعیف‌تر شسته می‌شوند و سپس مولکول‌هایی که میل پیوندی قوی‌تری دارند، جداسازی مؤثر انجام می‌شود.

 

2. مزایای محصول

2.1 راندمان بالا: اتصال قوی با سرعت جریان تا 40 برابر بیشتر از کروماتوگرافی مبتنی بر رزین را به دست می آورد. در مقایسه با کروماتوگرافی بستر بسته بندی شده سنتی، کروماتوگرافی غشایی زمان کلی فرآیند را تقریباً 30 تا 40 برابر کوتاه می کند.

2.2 راندمان اتصال بالا: کروماتوگرافی غشایی ظرفیت اتصال بالا و سرعت جریان بالا را تحت افت فشار کم نشان می‌دهد و به بیومولکول‌های باردار اجازه می‌دهد که در یک عبور از ستون جذب شوند.

2.3 مقیاس پذیر و انعطاف پذیر: سری کامل محصولات کروماتوگرافی غشایی می تواند نیازهای مختلف تصفیه بیوماکرومولکول را برآورده کند و همه مراحل از توسعه فرآیند تا تولید در مقیاس بزرگ را پوشش دهد. طراحی ساختاری{3}}نوع کپسول هم از عملکرد یکبار-و هم استفاده مجدد پس از تمیز کردن پشتیبانی می‌کند.

2.4 بهره وری بهبود یافته: طراحی جمع و جور ردپای تسهیلات را به حداقل می رساند. با حذف روش‌های بسته‌بندی ستون، تمیز کردن، اعتبارسنجی تمیز کردن، و روش‌های ذخیره‌سازی ستون، می‌توان سیستم را مستقیماً پس از تعادل بافر بدون بسته‌بندی یا ذخیره‌سازی ستون کار کرد. هزینه های نیروی کار را می توان تا 50 درصد کاهش داد.

 

3. پارامترهای فنی

3.1 مصالح سازه ای

	مقیاس آزمایشگاهی	مقیاس کوچک	مقیاس آزمایشی	مقیاس تولید
حجم غشا	0.2 میلی لیتر	5 میلی لیتر	140 میلی لیتر	5L
ساختار پشتیبانی غشایی	پلی پروپیلن (PP)
محفظه غشایی	پلی پروپیلن (PP)
ای حلقه	سیلیکون

3.2 ویژگی های عملیاتی

	مقیاس آزمایشگاهی	مقیاس کوچک	مقیاس آزمایشی	مقیاس تولید
حجم غشا	0.2 میلی لیتر	5 میلی لیتر	400 میلی لیتر	5L
نرخ جریان توصیه شده	1-6 میلی لیتر در دقیقه	25-150 میلی لیتر در دقیقه	2-12 لیتر در دقیقه	25-150 لیتر در دقیقه
حداکثر دمای عملیاتی	35 درجه
حداکثر فشار کاری	3bar (25 درجه)
حداکثر فشار دیفرانسیل	3bar (25 درجه)
شرایط نگهداری	محلول آبی اتانول 20% 乙醇水溶液 20%

شکل 1. تغییرات در ظرفیت بارگذاری کروماتوگرافی غشایی پس از استفاده های متعدد که با BSA نظارت می شود.

علاوه بر این، ما کارایی حذف پروتئین‌های سلول میزبان و اسیدهای نوکلئیک را با استفاده از کروماتوگرافی غشایی DEAE ارزیابی کردیم. نتایج به شرح زیر است.

	DNA				HCP
	بازیابی IgG	محتوای (pg/mg IgG) توسط RT PCR		فاکتور حذف	محتوای (ng/mg IgG) توسط Elisa		فاکتور حذف
اجرا کنید	%	قبل از غشاء DEAE	بعد از غشاء DEAE	ورود به سیستم	قبل از غشاء DEAE	بعد از غشاء DEAE	ورود به سیستم
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

جدول 1. نرخ حذف DNA و پروتئین های سلول میزبان از CHO{1}}IgG بیان شده با استفاده از کروماتوگرافی غشایی DEAE.

مجموعه ای از آزمایشات نشان داد که کروماتوگرافی غشایی Q می تواند به طور موثر ناخالصی ها را حذف کند، در حالی که نرخ بازیابی بالای IgG هدف را حفظ می کند.

علاوه بر این، کروماتوگرافی غشایی Gudiling را با مارک های وارداتی مقایسه کردیم و داده های ظرفیت بارگذاری به شرح زیر است.

شکل 2. عملکرد بارگذاری پروتئین های مختلف بر روی کروماتوگرافی غشایی و محصولات رقیب ما

ارزیابی کلی نشان می دهد که ظرفیت بارگیری ما با محصولات وارداتی قابل مقایسه است.

شکل 3. عملکرد ماژول کروماتوگرافی غشایی DEAE در آزمایش پروتئین کلاژن

با استفاده از ماژول کروماتوگرافی غشایی DEAE، نتایج اعتبارسنجی نشان داد که اکثر پروتئین های کلاژن هدف را می توان با استفاده از 135 میلی مولار NaCl جذب و شستشو داد.

از طریق آزمایش در شرایط شستشوی مختلف، ما دریافتیم که کروماتوگرافی غشایی و کروماتوگرافی ژل آگارز رفتار شستشوی مشابهی را نشان می‌دهند، که در آن خلوص پروتئین به طور قابل‌توجهی تحت غلظت‌های مختلف نمک متفاوت است. در تحقیق و توسعه و تولید عملی، تعیین کمی شرایط شستشوی تعادلی بهینه برای به دست آوردن پروتئین‌های هدف با خلوص بالا ضروری است.

 

4. کیس های کاربردی کلاسیک

حذف DNA، ویروس ها، پروتئین های سلول میزبان و اندوتوکسین ها

جذب پلاسمیدها، ویروس ها، اسیدهای نوکلئیک و پروتئین ها و همچنین خالص سازی الیگونوکلئوتیدها

 

5. گردش کار عملیاتی

5.1: آماده سازی و مونتاژ تجهیزات

5.1.1 ماژول کروماتوگرافی غشایی باید بر روی سیستم کروماتوگرافی AKTA به روشی مشابه ستون های رزین بسته بندی شده نصب شود و اطمینان حاصل شود که جهت جریان با فلش ها و جهت ورودی مطابقت دارد. با استفاده از اتصالات Luer یا اتصالات گیره وصل کنید.

5.1.2 نرخ جریان ورودی را روی 5-10 MV/min تنظیم کنید و از بافر تعادل برای تصفیه هوا استفاده کنید. شستشو را تا زمانی که هیچ حبابی در خروجی مشاهده نشود ادامه دهید، سپس خروجی تراوا را به سیستم کروماتوگرافی وصل کنید.

5.2:قبل از{0}استفاده از درمان

5.2.1: نرخ جریان ورودی را روی 5-10 MV/min تنظیم کنید و برای اطمینان از رسیدن غشاء به تعادل، پیش تیمار با 0.5 M NaOH را برای بیش از 5 MV انجام دهید.

5.2.2: تحت سرعت جریان یکسان، بیشتر با بافر تعادل (1× PBS) برای بیش از 5 MV پیش- عمل آوری کنید تا اطمینان حاصل شود که غشا به تعادل می رسد.

5.3 فرآیند کروماتوگرافی

5.3.1

سرعت جریان ورودی را روی 5-10 MV/min تنظیم کنید و قبل از{2}}بافر تعادلی را برای بیش از 5 MV تا زمانی که غشا به حالت تعادل برسد، درمان کنید.

5.3.2

پس از اینکه نمونه از قبل از طریق فیلتر 0.22 میکرومتر فیلتر شد، نمونه را بارگیری کنید تا بارگیری کامل شود یا ظرفیت بارگیری کروماتوگرافی به دست آید.

5.3.3

با بافر تعادل بیش از 10 مگاولت شستشو دهید تا جذب UV به سطح پایه کاهش یابد.

5.3.4

از شستشوی گرادیان یا شستشوی خطی با توجه به طراحی فرآیند استفاده کنید و در صورت نیاز نمونه ها را به صورت کسری جمع آوری کنید.

5.4، CIP Post{1}}تصفیه استفاده - CIP دستگاه کروماتوگرافی غشایی

5.4.1

سرعت جریان ورودی را روی 5-10 MV/min تنظیم کنید و تمیز کردن را در محل (CIP) با 0.5 M NaOH برای بیش از 10 MV انجام دهید تا زمانی که جذب UV به زیر خط پایه کاهش یابد.

5.4.2

پس از چرخش شستشو به مدت 30 دقیقه، به شستشو با آب بروید تا PH بین 7 تا 8 شود، سپس تمیز کردن را با اتانول 20 درصد ادامه دهید تا رسانایی تقریباً ثابت بماند.

5.5، ذخیره سازی کروماتوگرافی غشایی:

پس از استفاده و تکمیل CIP، ماژول غشایی را می توان با خیساندن در اتانول 20 درصد برداشته و ذخیره کرد یا به صورت آنلاین در دمای اتاق در محلول اتانول 20 درصد ذخیره کرد. محلول اتانول 20 درصد باید به طور دوره ای بررسی و جایگزین شود.

 

6. اطلاعات سفارش

فیلتر کپسول کروماتوگرافی غشایی تبادل آنیونی ضعیف-نوع DEAE

	مقیاس آزمایشگاهی-	مقیاس کوچک	مقیاس پایلوت	مقیاس تولید
مدل محصول	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
حجم غشا	0.2 میلی لیتر	5 میلی لیتر	400 میلی لیتر	5L

تگ های محبوب: کروماتوگرافی غشایی تبادل آنیون ضعیف deae، چین، تامین کنندگان، تولید کنندگان، کارخانه، عمده فروشی، عمده، در انبار، نمونه رایگان