کروماتوگرافی غشایی تبادل کاتیونی قوی SP

مقدمه ای بر CM یون ضعیف-محصولات کروماتوگرافی غشایی تبادلی

 

1. بررسی اجمالی

کروماتوگرافی تبادل کاتیونی ضعیف CM یک فناوری تصفیه است که در آن گروه‌های کربوکسی متیل به غشاء متصل می‌شوند تا یک ماژول عملکردی را تشکیل دهند. جداسازی بر اساس تفاوت در خواص بار و چگالی بار بیومولکول های مختلف به دست می آید. از آنجایی که اکثر ماکرومولکول های بیولوژیکی حاوی گروه های کربوکسیل یا هیدروکسیل هستند، ویژگی های بار و مقدار آنها را می توان با تغییر مقدار pH محلول بافر تنظیم کرد. پس از اتصال مولکول های زیستی به ماژول غشایی حامل بارهای مخالف، شستشو با تغییر قدرت یونی یا pH فاز متحرک انجام می شود. مولکول‌هایی که میل پیوندی ضعیف‌تری دارند، ابتدا شسته می‌شوند، در حالی که مولکول‌هایی که میل پیوندی قوی‌تری دارند، بعداً شسته می‌شوند و در نتیجه به جداسازی مؤثری دست می‌یابند.

 

2. مزایای محصول

2.1 سریع و کارآمد: ظرفیت اتصال بالا را می توان با سرعت جریان تا 40 برابر سریعتر از کروماتوگرافی مبتنی بر رزین{2}} معمولی بدست آورد. در مقایسه با کروماتوگرافی بستر بسته بندی شده سنتی، کروماتوگرافی غشایی می تواند زمان فرآیند را 30 تا 40 برابر کوتاه کند. نرخ جریان عملیاتی معمولی 10 MV/min است.

2.2 راندمان اتصال بالا: کروماتوگرافی غشایی ظرفیت بارگذاری بالا و نرخ جریان بالا را در شرایط افت فشار کم نشان می‌دهد و به بیومولکول‌های باردار می‌تواند در یک عبور از ماژول جذب شود.

2.3 مقیاس پذیر و انعطاف پذیر: طیف کاملی از محصولات کروماتوگرافی غشایی می تواند نیازهای مختلف پردازش بیوماکرومولکول را برآورده کند و مراحلی از توسعه فرآیند تا تولید{1}}در مقیاس بزرگ را پوشش دهد. طراحی کپسول به برنامه‌های یک‌بار{3} اجازه می‌دهد یا می‌توان آن‌ها را تمیز کرد و در صورت لزوم دوباره استفاده کرد.

2.4 افزایش بهره وری: طراحی جمع و جور ردپای تاسیسات را به حداقل می رساند. با حذف مراحل بسته بندی ستون، تمیز کردن، اعتبار سنجی تمیز کردن و ذخیره سازی ستون، پردازش می تواند پس از تعادل با حجم نسبتاً کمی از بافر آغاز شود. بدون نیاز به بسته بندی ستون، تمیز کردن یا ذخیره سازی، هزینه های نیروی کار را می توان تا بیش از 50٪ کاهش داد.

 

3 پارامترهای فنی

3.1 مصالح سازه ای

	مقیاس آزمایشگاهی	مقیاس کوچک	مقیاس پایلوت	مقیاس تولید
حجم غشا	0.2 میلی لیتر	5 میلی لیتر	140 میلی لیتر	5L
ساختار پشتیبانی غشایی	پلی پروپیلن
محفظه غشایی	پلی پروپیلن
ای حلقه	لاستیک سیلیکونی

3.2 ویژگی های عملیاتی

	مقیاس آزمایشگاهی	مقیاس کوچک-	مقیاس پایلوت-	مقیاس تولید
حجم غشا	0.2 میلی لیتر	5 میلی لیتر	400 میلی لیتر	5L
نرخ جریان توصیه شده	1-6 میلی لیتر در دقیقه	25-150 میلی لیتر در دقیقه	2-12 لیتر در دقیقه	25-150 لیتر در دقیقه
حداکثر دمای عملیاتی	35 درجه
حداکثر فشار کاری	3bar (25 درجه)
حداکثر اختلاف فشار	3bar (25 درجه)
شرایط نگهداری	محلول آبی اتانول 20 درصد

در مقایسه با محیط های معمولی، طول عمر کروماتوگرافی غشایی CM با ژل آگارز CM 6FF قابل مقایسه است.

شکل 1. تغییرات در ظرفیت بارگذاری کروماتوگرافی غشایی CM پس از استفاده های متعدد در آزمایش لیزوزیم.

علاوه بر این، ما کارایی حذف پروتئین‌های سلول میزبان و اسیدهای نوکلئیک را با کروماتوگرافی غشایی ارزیابی کردیم. نتایج در زیر نشان داده شده است.

جدول 1. نرخ حذف DNA و پروتئین های سلول میزبان در CHO{1}}مواد IgG بیان شده با استفاده از کروماتوگرافی غشایی CM

مجموعه ای از آزمایشات نشان داد که کروماتوگرافی غشایی CM می تواند به طور موثر آلاینده ها را حذف کند و در عین حال نرخ بازیابی بالای IgG هدف را حفظ کند.

	DNA				HCP
	بازیابی IgG	محتوای (pg/mg IgG) توسط RT PCR		فاکتور حذف	محتوای (ng/mg IgG) توسط Elisa		فاکتور حذف
اجرا کنید	%	قبل از غشاء کیو	بعد از ممبران Q	ورود به سیستم	قبل از غشاء کیو	بعد از ممبران Q	ورود به سیستم
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

با استفاده از کروماتوگرافی غشایی Gudiling CM در مقایسه با سایر برندها، داده های ظرفیت بارگذاری در زیر نشان داده شده است.

ظرفیت بارگیری (mg/ml)	جینگبیائو 1	هدایت کردن
لیزوزیم	18	23
تریپسین	17	20

جدول 2. عملکرد بارگیری پروتئین های مختلف در محصول ما در مقایسه با محصولات رقیب

ارزیابی کلی نشان می دهد که ظرفیت بارگیری ما با محصولات وارداتی قابل مقایسه است.

شکل 2. آزمایش ظرفیت بارگذاری ماژول کروماتوگرافی غشایی CM با استفاده از لیزوزیم به عنوان یک پروتئین استاندارد.

ظرفیت بارگذاری دینامیکی نیز با محصولات وارداتی مقایسه شد. راستی‌آزمایی نشان داد که لیزوزیم را می‌توان با استفاده از 160 میلی‌مولار NaCl شستشو داد، که امکان جذب مؤثر بیشتر پروتئین‌های هدف را فراهم می‌کند.

از طریق بهینه‌سازی شرایط شستشوی مختلف، متوجه شدیم که کروماتوگرافی غشایی رفتار شستشو مشابه کروماتوگرافی ژل آگارز را نشان می‌دهد، که در آن خلوص پروتئین به طور قابل‌توجهی تحت غلظت‌های مختلف نمک متفاوت است. در تحقیق و توسعه و تولید عملی، تعیین کمی شرایط شستشوی تعادل برای به دست آوردن پروتئین هدف با خلوص بالا ضروری است.

 

4. موارد کاربردی معمولی

• حذف DNA، ویروس ها و پروتئین های سلول میزبان
• جذب پلاسمیدها، ویروس ها و پروتئین ها و همچنین خالص سازی الیگونوکلئوتیدها
• رنگ‌زدایی آبگوشت تخمیر مخمر و جذب{0}پروتئین با ظرفیت بالا

 

5. روش عملیاتی / گردش کار

5.1: آماده سازی و مونتاژ تجهیزات:

5.1.1: ماژول کروماتوگرافی غشایی را روی یک سیستم کروماتوگرافی AKTA نصب کنید. روش نصب شبیه به رسانه کروماتوگرافی بستر بسته بندی شده است. اطمینان حاصل کنید که جهت جریان از فلش مشخص شده بر روی ماژول پیروی می کند. ماژول را می توان با استفاده از کانکتورهای Luer یا کانکتورهای گیره متصل کرد.

5.1.2 نرخ جریان ورودی را روی 5-10 MV/min تنظیم کنید و از بافر تعادل برای تخلیه هوا از ماژول استفاده کنید. شستشو را تا زمانی که هیچ حبابی در خروجی مشاهده نشود ادامه دهید، سپس خروجی تراوا را به سیستم کروماتوگرافی وصل کنید.

5.2.: آماده سازی قبل از-استفاده

5.2.1: نرخ جریان ورودی را روی 5-10 MV/min تنظیم کنید و پیش تصفیه را با استفاده از 0.5 M NaOH برای بیش از 5 MV انجام دهید تا اطمینان حاصل شود که غشا به تعادل می رسد.

5.2.2: تحت شرایط نرخ جریان یکسان، پیش تیمار با 1 M NaCl برای بیش از 5 MV انجام دهید تا اطمینان حاصل شود که غشا به تعادل می رسد.

5.3. فرآیند کروماتوگرافی

5.3.1 نرخ جریان ورودی را روی 5-10 MV/min تنظیم کنید و قبل از تصفیه با بافر تعادل برای بیش از 5 MV انجام دهید تا غشاء به حالت تعادل برسد.

5.3.2 پس از 0.22 میکرومتر قبل از فیلتر کردن، نمونه را روی ستون بارگذاری کنید و تا زمانی که کل نمونه اعمال شود یا ظرفیت بارگذاری کروماتوگرافی به دست آید ادامه دهید.

5.3.3 شستشو با بافر تعادل برای بیش از 10 MV تا زمانی که مقدار UV به خط پایه کاهش یابد.

5.3.4 با توجه به طراحی فرآیند، شستشوی گرادیان یا سیستم شستشوی خطی را اعمال کنید و کسری ها را در بخش هایی که لازم است جمع آوری کنید.

5.4 پست CIP{1}}استفاده از درمان - CIP (تمیز-در-محل) برای سیستم کروماتوگرافی غشایی.

5.4.1 سرعت جریان ورودی را روی 5-10 MV/min تنظیم کنید و با 1 M NaOH برای بیش از 10 MV درمان کنید تا زمانی که مقدار UV به زیر خط پایه کاهش یابد.

5.4.2 پس از 30 دقیقه شستشوی گردشی، با آب بشویید تا PH بین 7 و 8 شود، سپس به اتانول 20 درصد تغییر دهید و تمیز کردن را ادامه دهید تا رسانایی تقریباً بدون تغییر باقی بماند.

5.5 ذخیره سازی کروماتوگرافی غشایی

پس از استفاده و تکمیل CIP، ماژول غشایی را می توان با خیساندن در اتانول 20 درصد برداشت و ذخیره کرد، یا به صورت آنلاین در دمای اتاق در محلولی حاوی اتانول 20 درصد ذخیره کرد. محلول اتانول 20 درصد باید به طور مرتب بررسی و جایگزین شود.

 

6، اطلاعات سفارش

فیلتر کپسول کروماتوگرافی غشایی تبادل کاتیونی ضعیف از نوع CM-

	مقیاس آزمایشگاهی	مقیاس کوچک	مقیاس پایلوت	مقیاس تولید
مدل	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
ناحیه غشایی	0.2 میلی لیتر	5 میلی لیتر	400 میلی لیتر	5L

تگ های محبوب: کروماتوگرافی غشایی تبادل کاتیونی قوی sp، چین، تامین کنندگان، تولید کنندگان، کارخانه، عمده فروشی، عمده، در انبار، نمونه رایگان